方法负载参照袁兰的方法<6>，并稍作改动。将盖玻片培养的神经元，用磷酸盐缓冲液（PBS）漂洗3次，37条件下用10mol/LFluo-3/AM和10lPluronicF-127（18%）避光负载30min，PBS液洗脱细胞外未结合的荧光，再于37下保温10min，以促使胞内的酯化探针充分水解。将盖玻片置入Petri皿中，加入PBS液（PH7.4）以保证良好的生存环境。

　　细胞内Ca2+浓度的检测不同时间应用牛黄酸对损伤后神经元内Ca2+浓度的影响将负载好的培养皿固定在CLSM的载物台上，20倍物镜选择不同神经元扫描。激发光波长为488nm，发射光波长为530nm，固定所有扫描参数（激光强度5mW，扫描点数512512，扫描速度3张/秒，pinhole为60um），分析时选荧光*强的层面作为计算标准，由于Fluo-3/AM结合钙离子后其荧光强度与钙离子浓度成正比，因此，取每个细胞荧光强度测定值平均数表示该细胞内游离值。每组五张盖玻片，每片取5个视野细胞扫描计算均值。

　　统计学处理各组数值采用SPSS（11.0）软件系统处理，用xs表示，组间采用方差分析。方差不齐的情况下，用非参数统计的KIndependentSample统计，两两比较用ample方法分析。

　　结果神经元损伤后不同时间给予牛磺酸观察24h细胞内Ca2+值变化冲击伤后神经元内钙离子浓度急剧升高，明显高于正常对照组。而伤后立即给予牛磺酸治疗，显著降低了神经元内Ca2+的浓度，但仍明显高于正常对照组，说明牛黄酸对损伤后的神经元有保护作用。

　　神经元损伤后不同时间给予牛磺酸观察48h细胞内Ca2+值变化伤后48h，神经元内Ca2+值仍维持较高水平，立即给予牛磺酸治疗，显著降低了神经元内Ca2+的浓度，但仍高于正常对照组，说明牛黄酸对损伤后48h的神经元仍有保护作用。

　　牛磺酸分子量为125，它以游离形式广泛存在于动物各组织细胞内，对维持细胞生理功能和抵抗病理性损伤有重要作用<10>.本实验结果表明，与损伤组比较，牛磺酸各治疗组神经元内Ca2+水平降低，均有显著性差异。伤后给予牛磺酸治疗，无论维持24h还是48h，神经元内Ca2+值均显著降低。经牛磺酸治疗48h与24h比较，神经元内Ca2+值降低明显，明显低于正常对照组。这表明当胞浆内钙大量增加时，牛磺酸能明显提高肌浆网和线粒体钙贮存量、刺激细胞膜上钙的摄取、通过调节钙通道的开与关及抑制钙在细胞膜上的被动扩散作用。有研究<11>表明牛磺酸对细胞内钙离子有双向调节作用，即牛磺酸能使神经细胞内钙离子浓度轻度升高，又能使处于高钙状态的细胞内Ca2+浓度下降，这可能是通过对钙稳态的调节来阻止细胞内钙超载。使神经细胞间突起连接紧密，细胞存活数量增加延缓神经细胞衰老，保护神经细胞。

　　本实验是建立于细胞水平的创伤模型，至于整体水平上效果如何，还有待进一步研究。